文獻:Platelet-rich plasma influence on human osteoblasts growth. Clin Oral Implants Res. 2005 Aug;16(4):456-60.

 

實驗方法:

一、細胞培養

人類成骨細胞(hFOB1.19,編號CRL11,372)由美國典型培養物保藏中心提供。實驗中使用來自第五、六代的細胞。這些單層細胞在改良伊格爾氏培養基(MEM)和Ham's F12培養基(HAM-F12)以一比一的劑量混合10%濃度的胎牛血清和1%抗生素(青黴素、鏈黴素和兩性黴素)。在371℃下將細胞維持在含有5%二氧化碳的潮濕培養箱中。

當細胞融合時,使用0.1%胰蛋白酶(Sigma; 5mg / ml)和0.1%不含鈣和鎂的杜克斯科氏磷酸鹽緩衝鹽水溶液。

 

二、血小板收集

血漿由健康的男性志願者的靜脈血取得。將血液吸入含有500毫升抗凝劑檸檬酸鈉的5毫升真空採血管中。PRP是按照2003年Macedo的臨床協議計劃製成。三小時後,將PRP在細胞培養基中稀釋,以增殖評估細胞的成骨作用。先前的研究表明,PRP的生長因子的活性在抽血後四小時降低。因此研究使用的PRP約在採血後的三小時內取出。為獲得平均值,同一男性志願者抽血共在同一週重複三次。


 

測量方法:

評估人類成骨細胞增殖

在96孔組織培養板中製備hFOB1.19成骨細胞培養物(3×104個細胞/孔)。經過24小時的培養後,細胞培養基分別被含有50%、25%、12.5%和6.125%稀釋PRP的培養基替代,不含胎牛血清(FBS)或含有10%的實驗各做一次。

四天後,在371℃、潮濕並含5%二氧化碳的環境中,將50毫升的MTT:HAM-F12 (1 : 1) 溶液加入組織培養板中的所有孔,並保持371℃四小時。

 

接著,在各孔中加入100毫升二甲基亞碸,用以溶解甲䐶結晶。輕輕搖動組織培養板5分鐘,使晶體完全溶解,在540nm處的多孔分光光度計上讀取吸光度,評估PRP的影響。細胞生長百分比計算為[(A-B)/A*100]%,其中A和B分別為對照和處理細胞的吸光度。在該計算中,B從A中減去並除以處理組的吸光度乘以100,得到細胞生長的百分比。


 

結果:

MTT法檢測人類成骨細胞增殖

這個實驗測量了不同濃度的PRP在不含及含10%胎牛血清(FBS)的情況下對hFOB1.19人骨形成細胞增殖影響的結果。同樣方法做三次獨立實驗,算出平均值並以細胞生長百分比表示。

研究指出,在含有10%胎牛血清(FBS)的組中的細胞生長率總是比較高,對於細胞生長的最大影響介於675.7%和824%之間。對於接受50%PRP的組的中值為695.7%。

(圖)顯示了本研究也納入是否含10%胎牛血清(FBS)的變異結果。